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        說到RNA提取試劑盒你對它真的了解了嗎?

         發布時間:2022-07-23 點擊量:266
         
          RNA提取試劑盒用于從細胞、組織、新鮮血液和病毒中提取200bp及以下的smallRNA,用LB10裂解樣品后,加入氯仿,溶液分為無色水相和粉紅色有機相,RNA在水相中;用RNA硅膠膜離心柱特異地吸附水相中的大分子量RNA(28SrRNA,18SrRNA,mRNA),流出液中的smallRNA用miRNA硅膠膜離心柱特異地吸附。與其它miRNA提取方法相比,該試劑盒裂解能力強、提取量高、專一性強,應用范圍廣。
          RNA提取試劑盒其主要特征在于分離裝置中采用纖維素為固相載體,利用融合蛋白CBD-SA作為生物橋聯劑,以生物特異性偶聯法代替傳統的物理吸附法和化學鍵合法活化纖維素固相載體,活化后的固相載體能夠高效率的結合生物素化的試劑,可用于蛋白或核酸的分離。構建cDNA文庫、蛋白質的體外翻譯和RT-PCR方法檢測稀有的mRNA等研究常常需要從總RNA中分離mRNA,mRNA只占總RNA的1%左右,但由于帶poly(A)尾巴,所以可以通過與Oligo(dT)的親和結合而與其RNA(如rRNA、tRNA等)分離開。
          RNA提取試劑盒使用方法:將0.5mL結合液加入到一管裝有1mgOligo(dT)纖維素的離心管中,放置5分鐘后離心吸棄上清后待用。將制備的總RNA100μL加熱到65℃5分鐘后加入等體積的結合液,轉移到裝有Oligo(dT)纖維素的離心管中,顛倒混勻數次,離心后將上清轉移到一個離心管中。用0.5mL結合液,混勻后4℃200g離心5分鐘,小心棄上清。重復上步洗3-5次,用RNase-free水洗脫mRNA,用微量核酸沉淀劑沉淀回收mRNA。
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